在藥品分析方法建立和驗證的過程中，準(zhǔn)確度驗證是其中極為重要的一項。作為分析人員，你是否會遇到回收率實驗總不合格，結(jié)果忽高忽低？這也許是雜質(zhì)溶解性在作怪！以下是我在實際工作過程中對于方法建立、化合物溶解性與回收率方面的一些心得，與大家分享。
對于方法建立起初需要對化合物的性質(zhì)進(jìn)行預(yù)判，對化合物和其相關(guān)雜質(zhì)的溶解度進(jìn)行考察，以備選擇正確的稀釋液以及稀釋液配比。
如果稀釋液及其比例的選擇不正確，會在分析方法建立之初及方法學(xué)驗證階段出現(xiàn)問題。
下面是稀釋液配比不一致，造成回收率試驗波動較大的典型案例：
準(zhǔn)確度驗證原方案
第一次：
第二次：
分析原因
?兩次回收率結(jié)果檢測不平行，重現(xiàn)性結(jié)果差異大。
?增大稱樣量、增大移液體積、更換實驗員操作，排除了人員儀器操作等因素。
?分析實驗方案，對比可知對照品溶液和回收率溶液溶劑配比不一致。
① 空白溶劑：0.1mol/L鹽酸-甲醇（1:9）
②對照品溶液溶劑配比：0.1M鹽酸-甲醇（0.0005ml:0.9995）=（1:1999）
③100%回收率溶液溶劑配比：0.1M鹽酸-甲醇（5.0005ml:44.9995）≈（1:9）
?回收率偏高，原因分析：
對照品溶液中雜質(zhì)峰面積偏小：雜質(zhì)在0.1mol/L鹽酸中易溶解，后步稀釋采用甲醇稀釋，可能會導(dǎo)致該雜質(zhì)析出，從而使對照品峰面積偏??；因此會導(dǎo)致回收率偏大。
結(jié)論：雜質(zhì)與API受溶解度影響較大，肉眼明視溶液澄清，但內(nèi)在溶解性存在差異，導(dǎo)致回收率重現(xiàn)性差異較大。
驗證試驗
雜質(zhì)儲備液：精密稱取雜質(zhì)對照品2mg，置10ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸1ml使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置20ml量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得（1000%）
對照品溶液：精密量取雜質(zhì)儲備液1ml，置10ml量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻
經(jīng)驗總結(jié)
?各雜質(zhì)與API溶解性在分析方法建立及驗證中微妙變化會影響實驗結(jié)果；
?溶劑的選擇、重現(xiàn)性驗證在分析方法建立中尤為重要；
?試驗操作精準(zhǔn)，排出操作誤差、設(shè)備誤差，更有利于結(jié)果分析判斷。
溫馨提示：主成分在稀釋劑中的飽和溶解度，最好滿足飽和溶解度大于3倍的供試品濃度！
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關(guān)于我們：
北京新領(lǐng)先雜質(zhì)研究事業(yè)部，致力于原料藥注冊申報及雜質(zhì)定向合成，通過雜質(zhì)定向合成及雜質(zhì)制備富集，獲取雜質(zhì)對照品，解決藥物研究中雜質(zhì)研究難點(diǎn)。通過制定有效的雜質(zhì)研究和控制策略，降低質(zhì)量研究工作量，縮短研發(fā)周期；創(chuàng)新分析方法，解決常規(guī)分析中分離與分析的難點(diǎn)，建立快速、穩(wěn)定的分析方法。
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